數(shù)字PCR技術(shù)服務(wù)
來源：本站 作者：jiyuanbio 時(shí)間：2025/5/23
一、數(shù)字 PCR 技術(shù)的應(yīng)用方向
- 腫瘤學(xué)研究
- 基因突變檢測(cè)：在腫瘤精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)的伴隨診斷中，可精準(zhǔn)檢測(cè)如 TP53 R175H、EGFR L858R 等腫瘤驅(qū)動(dòng)基因的點(diǎn)變異。相較于二代測(cè)序技術(shù)，數(shù)字 PCR 靈敏度可達(dá) 0.01% 甚至 0.001%，對(duì)低頻突變檢測(cè)與定量更具優(yōu)勢(shì) 。在 “液態(tài)活檢” 中，能有效減少正常體細(xì)胞 DNA 干擾，精準(zhǔn)檢測(cè)痕量的循環(huán)腫瘤 DNA（ctDNA） 。
- 拷貝數(shù)變異（CNV）檢測(cè)：異常 CNV 是多種人類疾病發(fā)生的重要分子機(jī)制。數(shù)字 PCR 擺脫對(duì) Ct 值依賴，直接獲取靶基因絕對(duì)拷貝數(shù)，檢測(cè)精度遠(yuǎn)超二代測(cè)序、芯片雜交等技術(shù)，可對(duì)相關(guān)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行有效驗(yàn)證 。
- 基因融合檢測(cè)：對(duì)非小細(xì)胞肺癌患者的 ALK 融合、肺腺癌患者的 ROS1 融合等基因融合檢測(cè)具有高靈敏度與準(zhǔn)確度，能克服免疫組化（IHC）靈敏度低、熒光原位雜交（FISH）耗時(shí)久且假陰性概率高等問題 。
- 無創(chuàng)產(chǎn)前診斷
目前基于 NGS 平臺(tái)的無創(chuàng)產(chǎn)前診斷（NIPT）精確度有限，數(shù)字 PCR 的高靈敏度和精準(zhǔn)度為其在 NIPT 領(lǐng)域應(yīng)用奠定良好基礎(chǔ)，已在脊髓性肌萎縮、血友病、鐮刀型貧血等遺傳病的無創(chuàng)產(chǎn)前診斷中展現(xiàn)卓越性能 。
- 傳染病檢測(cè)
- 病毒載量測(cè)定：可對(duì)病毒載量進(jìn)行絕對(duì)定量，通過檢測(cè)單位血漿中游離病毒 RNA 拷貝數(shù)，提示病毒感染者所處時(shí)期、判定疾病進(jìn)展、監(jiān)測(cè)抗病毒藥物療效及耐藥性問題 。
- 病原體檢測(cè)：在受到污染的食品和供水中，能檢測(cè)出導(dǎo)致人類疾病的低含量病原體，為食品安全與飲水安全提供保障 。
- 基因表達(dá)分析
可提供比實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 更精確的基因差異表達(dá)研究，尤其適用于靶基因表達(dá)差異微小的情況，如 mRNA、microRNA、lncRNAs 等的表達(dá)分析，以及等位基因不平衡表達(dá)、單細(xì)胞基因表達(dá)分析、外泌體核酸分子定量分析等 。
- 其他應(yīng)用
- 轉(zhuǎn)基因生物檢測(cè)：實(shí)現(xiàn)對(duì)植物基因突變和轉(zhuǎn)基因生物的高靈敏度檢測(cè)和絕對(duì)定量，助力農(nóng)業(yè)生物技術(shù)領(lǐng)域研究與監(jiān)管 。
- 環(huán)境監(jiān)測(cè)：可檢測(cè)土壤中經(jīng)土壤傳播的病原體和抗生素抗性基因，評(píng)估人類及生態(tài)系統(tǒng)暴露風(fēng)險(xiǎn) 。
- 基因編輯驗(yàn)證：針對(duì) CRISPR - Cas9 技術(shù)的基因編輯成果，能有效驗(yàn)證基因編輯的成功性，檢測(cè)脫靶效應(yīng) 。
二、數(shù)字 PCR 技術(shù)服務(wù)送樣流程
- 樣本類型及要求
- DNA/cfDNA 樣本：DNA 總量一般要求達(dá)到 10ng / 反應(yīng)，濃度≥0.6ng/ul/ 反應(yīng)，體積≥15ul / 反應(yīng) 。
- 質(zhì)粒樣本：濃度需清晰標(biāo)示并標(biāo)明 “次方”，稀釋至 6 次方及以下濃度，送樣體積根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求確定 。
- 樣本編號(hào)與信息
樣本應(yīng)提前規(guī)劃簡潔清晰的編號(hào)，確保檢測(cè)前核對(duì)與檢測(cè)樣本無誤。同時(shí)，需提供詳細(xì)樣本信息，如樣本類型、來源、保存條件、預(yù)期檢測(cè)項(xiàng)目等，以便技術(shù)人員更好處理與分析樣本 。
- 樣本運(yùn)輸
根據(jù)不同樣本類型要求，選擇合適運(yùn)輸方式與保存條件。需低溫保存的樣本，確保運(yùn)輸全程處于規(guī)定低溫環(huán)境，如使用干冰維持低溫，防止樣本變質(zhì)影響檢測(cè)結(jié)果 。
- 樣本接收與核對(duì)
實(shí)驗(yàn)室接收樣本后，技術(shù)人員將嚴(yán)格按照送樣信息對(duì)樣本進(jìn)行核對(duì)，包括樣本編號(hào)、類型、數(shù)量、保存狀態(tài)等。若發(fā)現(xiàn)樣本不符合要求，將及時(shí)與送樣方溝通，協(xié)商解決方案 。
- 檢測(cè)流程啟動(dòng)
核對(duì)無誤的樣本進(jìn)入數(shù)字 PCR 檢測(cè)流程，包括核酸提取、反應(yīng)體系配制、PCR 擴(kuò)增、熒光信號(hào)檢測(cè)與數(shù)據(jù)分析等步驟，最終為客戶提供準(zhǔn)確可靠的檢測(cè)報(bào)告 。
